根據(jù)細胞培養(yǎng)時是否附著在支持介質(zhì)上，分為貼壁細胞和懸浮細胞。

貼壁細胞天生容易貼壁，這為后續(xù)實驗提供了便利條件。

但是懸浮細胞在培養(yǎng)基中懸浮生長，如何像貼壁細胞一樣好操作，一直是大家的夢想。

一 傳統(tǒng)的方法：細胞準(zhǔn)備與固定

（1）單層生長細胞：取對數(shù)生長細胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成單細胞懸液。將細胞接種到預(yù)先放置幾張6×22mm蓋玻片的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-3天，待細胞接近長成單層，取出蓋玻片，進入PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次，然后根據(jù)實驗?zāi)康?，選擇適當(dāng)固定劑固定細胞。常用固定劑有：95％乙醇（固定時間10-30min），丙酮（5－10min）等。

（2) 懸浮生長細胞：取對數(shù)生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，或用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片，把細胞片浸入95％乙醇或丙酮中固定。

2 將已經(jīng)固定的細胞玻片放入蓋片染色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。

3 滴加適當(dāng)稀釋的特異性抗體，置于濕盒內(nèi)，37度保溫30－60min或度冰箱過夜

4 PBS振洗3次，每次5min，吹干。

5 滴加適當(dāng)稀釋的熒光素標(biāo)記抗體，置于濕盒內(nèi)，37度保溫30－60min。

6 PBS振洗2次，每次5min，然后用蒸餾水振洗1次。

7 50％緩沖甘油封片。

二 Shi-Fix玻片最新方法

Shi-Fix玻片，可以讓我們像貼壁細胞一樣對懸浮細胞做免疫熒光，如下是使用Shi-Fix做的實驗結(jié)果。簡單的四部，告別傳統(tǒng)的自己涂片，自己甩片，自己烤片等作坊式方法。